分光光度計的工作原理

來源：閱讀(du)：511 發布時間：2022-07-21 10:01:29

分光光度計的基本工作原理是利用物質對某種波長的光具有選擇性吸收的特性建立起來的鑒別物質或測定其含量的一項技術。物質對光（對光的波長）的吸收具有選擇性，不同的物質都有各自的吸收光帶，所以，當光色散后的光譜通過某一溶液時，其中某些波長的光線就會被溶液吸收。

單色光輻射穿過被測物質溶液時，被該物質吸收的量與該物質的濃度和液層的厚度（光路長度）成正比，即符合比爾定律。

T=l/lo lg (lo/l) =εcb

T為透過率，lo為入射光強度，1為透射光強度，A為消光值（吸光度），ε為吸收系數，b為溶液的光徑長度，c為溶液的濃度。從以上公式可以看出，當入射光、吸收系數和溶液厚度一定時，透光率是根據溶液的濃度而變化的。

朗伯一比爾定律概念圖

分光光度計主要由光源、單色器、樣品室、檢測器、信號處理器和顯示與存儲系統組成。分光光度計采用一個可以產生多個波長的光源，通過系列分光裝置，從而產生特定波長的光源，光源透過測試的樣品后，部分光源被吸收，計算樣品的吸光值，從而轉化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。

分光光度計結構圖

常用的波長范圍為：（1）200--400nm的紫外光區，（2）400~760nm的可見光區，（3）2. 5~25μm(按波數計為4000cm<-1>~400cm<-1>)的紅外光區。所用儀器為紫外分光光度計、可見光分光光度計（或比色計）、紅外分光光度計或原子吸收分光光度計。為保證測量的精密度和準確度，所有儀器應按照國家計量檢定規程或本錄規定，定期進行校正檢定。分光光度計已經成為現代分子生物實驗室常規儀器。常用于核酸，蛋白定量以及細菌生長濃度的定量。